過表達(dá)慢病毒構(gòu)建及包裝實(shí)驗(yàn)

1 、過表達(dá)慢病毒構(gòu)建及包裝特點(diǎn)：

1.1 直接包裝成為假病毒顆粒，對分裂和非分裂細(xì)胞均有感染作用，適合RNAi研究和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞 (比如神經(jīng)元細(xì)胞、干細(xì)胞或其它原代細(xì)胞)。

1.2 可以通過簡單方式，在短時(shí)間內(nèi)獲得穩(wěn)定表達(dá)特定基因的多種細(xì)胞株。

1.3 可用于基因敲除、基因**和轉(zhuǎn)基因動物研究。

1.4 無需轉(zhuǎn)染試劑，操作簡便。

1.5 可以根據(jù)客戶需要制備多種標(biāo)記。

2、過表達(dá)慢病毒構(gòu)建及包裝原理：

慢病毒（Lentivirus）是逆轉(zhuǎn)錄病毒的一種。構(gòu)建的siRNA / miRNA慢病毒載體，與化學(xué)合成的siRNA和基于瞬時(shí)表達(dá)載體構(gòu)建的普通siRNA載體相比，一方面可以擴(kuò)增替代瞬時(shí)表達(dá)載體使用，另一方面，Lentivirus-siRNA克隆經(jīng)過慢病毒包裝系統(tǒng)包裝后，可用于感染依靠傳統(tǒng)轉(zhuǎn)染試劑難于轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系如原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞和處于非分裂狀態(tài)的細(xì)胞，并且在感染后可以整合到受感染細(xì)胞的基因組，進(jìn)行長時(shí)間的穩(wěn)定表達(dá)。

3 、過表達(dá)慢病毒構(gòu)建及包裝流程：

3.1 含有目的基因的慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建和質(zhì)粒純化提取。

注：客戶也可以提供構(gòu)建好的重組慢病毒表達(dá)載體。

3.2 慢病毒表達(dá)載體與包裝系統(tǒng)共轉(zhuǎn)染病毒包裝細(xì)胞。

3.3 收集病毒液。

3.4 純化和濃縮病毒。

3.5 分裝、- 80 oC保存。

3.6 滴度測定及無菌檢測。