細(xì)胞成脂誘導(dǎo)

實驗操作流程:
成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液配備與誘導(dǎo)操作:
1.準(zhǔn)備含10%FBS的a-MEM培養(yǎng)液;
2在量好的EM培養(yǎng)波中添加5OuM抗壞血酸10mm微做甘油00m地s米松;
3、準(zhǔn)備6吼培養(yǎng)板，將P4細(xì)胞按照5*103個平方重米的規(guī)格接種于
始a-
EM培養(yǎng)液中;
4、待細(xì)胞長至基本融合后，
更換上述制備完成的成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)液;
5、每三天換液一次，細(xì)胞長至7天時進(jìn)行堿性研觸朝雜色;
6、二十八天后再進(jìn)行礦化結(jié)節(jié)的茜素紅染色。
素紅染色方法介紹:
1.去除細(xì)胞當(dāng)前使用培養(yǎng)液，使用PBS清洗兩次;
2使用10%甲醛室溫固定15分鐘，完成后使用重蒸倫水中洗兩次;
3按照1ml風(fēng)加入40mM的曹索紅染色波，室溫孵育20m并輕微擺蕩;
4、清除掉沒有*結(jié)合的染料，用重蒸饋水票洗并振蕩5min重復(fù)4次;
5、傾斜放置2min吸取多余的重蒸溫水:倒置昱微鎮(zhèn)觀察拍照記錄。’
細(xì)胞成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)液配備與誘導(dǎo)操作:
1、配置FBS10%含重的HG DMEM培養(yǎng)液;
2、在限制完成的C DMIE.解液中加入川地s米松1u/m胰島素，20時喉美辛和0 5mM BuXx，
3、準(zhǔn)奮6孔培養(yǎng)板，將P4細(xì)胞按照2x104個平方厘米的規(guī)格接種于
票始HG-DMEM培養(yǎng)液中
小待細(xì)胞長至基本融合后，更換。上述制備完成的細(xì)胞成脂誘導(dǎo)培養(yǎng)波培養(yǎng)2天，
在用只含有10ug/m1胰島素的成脂維持培養(yǎng)液培
養(yǎng)伏，如此交替循環(huán)培養(yǎng)至1天，使用紅油0染色。
紅油0染色方法介紹:
1、去除細(xì)胞使用的當(dāng)前培養(yǎng)液，使用PBS清洗兩次;
2、27 .5%甲醛室溫固定20分鐘;
3、重蒸演水清洗3此，空氣中干燥;
4、加入0.5%的紅油室溫孵育- -小時;
5、配制70%乙醇溶液清洗3次;
6、倒置顯微鏡觀察拍照記錄。